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扫描电子显微镜的样品制备流程

    扫描电子显微镜的样品制备

  制样的任务是通过一系列处理,尽量完美的保存样品的固有形态,同时需改变其物理特性,使其适合在电镜下观察。样品制备的好坏直接关系到电子显微图像的观察效果和对图像的正确解释。根据样品的种类、形状和导电性等差异,不同种类的样品采用不用的制备方法。

蔡司扫描电镜

蔡司扫描电镜

  生物样品

  取材

  暴露要观察的最佳观察面;

  注意事项:

  ①迅速准确,取材动作要快,部位要准;

  ②动作轻巧,保护好拟观察面,解剖器械要锋利,避免挤压牵拉组织,造成人为损伤;

  ③厚度要小,满足观察的最小体积,厚度为<2mm;

  ④样品纯净,避免污染;

  ⑤悬浮溶液浓度要合适,过浓会造成样品堆积,过稀又造成观察困难。

  清洗

  用生理盐水或磷酸盐缓冲液清洗去除表面的附着物、黏液和杂质,获得清洁的观察表面;组织和清洗液为1:20体积比轻摇清洗。对于游离细胞、微生物采用离心清洗法。

  固定

  用2.5%戊二醛和1%锇酸固定,保存组织细胞结构,增加样品的导电性;

  脱水

  30%-50%-70%-80%-90%-100%酒精或丙酮梯度脱水,置换组织中的水分;脱水时间根据样品大小和性质调整。

  干燥

  去除样品中残存的液体,使样品中不含液态物质的过程。液态物质脱离样品表面时必须克服表面张力,其反作用力会使样品表面结构发生形变。常用临界点干燥法,在临界状态(零表面应力)下使样品干燥,减少样品形变。

  粘样

  将样品用导电胶粘到样品座上,保证样品在样品座上的稳定性,增强样品与样品座之间的导电性,避免观察时产生荷电现象。

  镀膜

  改善生物样品的导电性,提高二次电子的产额,改善图片成像质量并增加样品的机械强度。

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